domingo, diciembre 28, 2003

Otro uso posible del medicamento más universal, la aspirina

Me llama la atención por lo llamativo de una posible aplicación de la aspirina en las infecciones por Candida albicans en la que se presuma la formación de un biofilm (infección de cateteres). Alem MAS y Douglas LJ publican en Antimicrobial Agents and Chemotherapy que la aspirina es capaz de inhibir la formación de biofilm por Candida albicans a concentraciones similares a las que alcanza en nuestro organismo a dosis terapeuticas.

El mecanismo de la aspirina es posiblemente por inhibición de una enzima con función similar a la ciclooxigenasa humana y parece ser fundamental para la patogénesis de la levadura. La adición de prostaglandinas evita esta acción de la aspirina.

Effects of Aspirin and Other Nonsteroidal Anti-Inflammatory Drugs on Biofilms and Planktonic Cells of Candida albicans. Antimicrob. Agents Chemother. 2004. 48: 41-47

lunes, diciembre 15, 2003

Ahora sobre Papiloma virus

Recomiendo leer por su simplicidad el caso clínico que aparece semanalmente en New England Journal of Medicine y que se publicó el 16 de Octubre de 2003. Se que hace mucho que se ha publicado y ya habrá ido de mano en mano pero yo lo he leido esta semana pasada, es de esos archivos que uno descarga y se queda guardado en el disco duro para otro momento.

El caso clínico es de una mujer cuya citología presenta el mismo resultados en dos ocasiones seguida, ASCUS, y es enviada al Ginecologo para mayor estudio. Este caso clínico se convierte en una revisión del screening del cancer cervical en la que subraya la importancia del estudio de HPV por técnicas moleculares. Describe de igual manera el protocolo seguido por los exponentes para el cancer cervical y auque no posee la publicación ningún algoritmo de tal protocolo es fácil ir dibujandolo en una hoja aparte conforme se va leyendo.

una página aclaratoria de L. innocua

Un amigo me pasa una página del FDA que incide la diferenciación entre L. innocua y L. monocytogenes.

http://www.cfsan.fda.gov/~ebam/bam-10s5.html

Los fenotipo habituales de L. innocua son no hemolíticos y los de L. monocytogenes son hemolíticos aunque puede ocurrir lo contrario en ambas especies.

martes, diciembre 02, 2003

Listeria innocua

Imagino la sorpresa de los autores del artículo que aparece en el Journal of Clinical Microbiology de Noviembre (Fatal Case of Listeria innocua Bacteremia. Monique Perrin, Michel Bemer, and Catherine Delamare. Journal of Clinical Microbiology. 2003;41(11):5308-5309.) sobre un aislamiento de Listeria innocua en hemocultivo de un paciente que fallece debido a shock séptico por colangitis. El aislamiento de un bacilo gram positivo, catalasa positivo y no hemolítico te hace decir ¡¡un coryne!! - Pues nada, un API de Coryne.
Pero si te da un código que cuando leemos su correspondencia tenemos ""good identification" of Listeria monocytogenes and/or L. innocua" ya tenemos el problema, ¿no era no hemolítico?
- A ver, aglutinamos con anti-L. monocytogenes.
- Pues no aglutina
- Que raro
- Hacemos test CAMP.
- Pues da positivo, mira. Esto lo puede diferenciar de L. innocua y puede ser un serotipo de L. monocytogenes que no esta controlado. Esto lo podemos identificar como L. monocytogenes pues no está descrita la patogenicidad de L. innocua, pero de todas formas hay que mandarlo a un centro de referencia.

Al cabo del tiempo:
-Mira ya ha llegado la identificación del aislamiento de Listeria y lo clasifican como L. innocua tras estudio de secuenciación y realización de API Listeria
- Jo, que sorpresa y que poco sabemos sobre estos bichos.

jueves, noviembre 27, 2003

Sobre Mimi virus

En agua de una torre de refrigeración se observaron amebas que presentaban cocos gram positivos en su interior. No sé lograba aislar ninguna bacteria y mediante PCR no se detectaban secuencia de RNAr 16S. Se observó al microscopio electrónico la ameba y se comprobó que no presentaba cocos gram positivos en su interior si no partículas virales de gram tamaño de morfología icosaedrica.

Este hallazgo se ha publicado en Science.

A Giant Virus in Amoebae Bernard La Scola, Stéphane Audic, Catherine Robert, Liang Jungang, Xavier de Lamballerie, Michel Drancourt, Richard Birtles, Jean-Michel Claverie, and Didier Raoult Science 2003 March 28; 299: 2033

Este virus tiene un tamaño similar a varias especies de bacterias y por ello se denominan Mimi Virus (por similitud a las bacterias; "mimicking microbes"). Son virus DNA de doble cadena de 800 kb. Este virus ha obligado crear a una nueva familia de virus Mimiviridae, emparentado en cierta manera a la familia Poxviridae.

La asociación de este virus con enfermedad humana es aún indirecta. La prevalencia serológica de este virus es mayor en grupo de enfermos por neumonía extrahospitalaria que en el grupo control. Tambien DNA de Mimivirus se ha detectado mediante PCR en lavado broncoalveolar de enfermo con neumonía y en ningún caso control.

domingo, noviembre 23, 2003

Nuevo agente descrito productor de neumonia

: "Didier Raoult, MD, from Marseille, France,[1] reviewed Mimi virus -- a newly described, giant (400 nm in diameter) DNA virus that appears as a gram-positive coccus, multiplies in human macrophages, and is found in water and intra-amoebae (eg, Legionella).[2] Evidence that this organism causes pneumonia was supported by its detection by polymerase chain reaction (PCR) in bronchoalveolar lavage (BAL) specimens. Serologic studies showed elevated titers (> 1:100) by microimmunofluorescence in 146/497 (29%) patients with community-acquired pneumonia (CAP), compared with 95/511 (19%) controls (P = .001), and seroconversion in 5/26 (19%) CAP patients vs 0/50 controls. The author concluded that this is a new family of giant viruses that are as large as Mycoplasma, appear as a gram-positive coccus, are found in water, and may cause community-acquired or nosocomial pneumonia"

aunque me llama la atención que diga que son virus tan grande que se ven como gram positivo, no sabia yo de eso. Ya vere que hay de esto

viernes, noviembre 14, 2003

Y sigue la serie en Journal of Clinical Investigation sobre percepción de quorum (quorum sensing, QS)

Pseudomonas aeruginosa quorum sensing as a potential antimicrobial target. Roger S. Smith and Barbara H. Iglewski. J. Clin. Invest. 112:1460-1465 (2003).

There are two QS systems in P. aeruginosa:
las system consists of the LasR transcriptional regulator and the LasI synthase protein in the presence of signal molecule AHL, LasR forms multimers, and that only the multimeric form of this protein is able to bind DNA and regulate the transcription of multiple genes.
RhlI and RhlR proteins: RhlI synthase, and RhlR is the transcriptional regulator .

The majority of the genes regulated by QS were found to be hypothetical or of unknown function. In all studies, a large number of the known genes were found to be probable virulence factors; however, several other identified genes may also fall into this category.QS regulates many genes via indirect mechanisms. A large number of the QS-regulated genes were classified as transcriptional regulators or as members of a two-component regulatory system

deletions of one or more QS genes result in reduced P. aeruginosa virulence compared with wild-type P. aeruginosa. QS has also been shown to be functional during P. aeruginosa infections in humans. In sputum samples from cystic fibrosis patients colonized with P. aeruginosa, levels of transcripts for QS genes were found to correlate with those of QS-regulated genes, indicating that QS was regulating their expression during infection

AHLs produced by P. aeruginosa are able to interact with eukaryotic cells and to stimulate the production of various factors that may affect the pathogenesis of this bacterium.

Several components of the QS networks represent ideal targets for potential therapeutics
a. A synthetic halogenated-furanone compound is able to inhibit the production of many QS-induced factors.
b. Antibodies specific for AHLs inhibit QS and may be useful as therapeutics
c. An alternative approach to the inhibition of QS is the use of antisense oligonucleotides that specifically bind to lasR/lasI or rhlR/rhlI transcripts and inhibit gene expression

viernes, noviembre 07, 2003

Sistemas de comunicación entre bacterias

A grandes rasgos se describen dos sistemas de comunicación intraespecíficos (señales a bacterias de la misma especie) bacterianos.

En Gram negativos es el sistema Luxl/LuxR y la señal transmitida es mediada por una acil-homoserina-lactona. Luxl produce una acil-homoserina-lactona (AHL) que difunde libremente a traves de la membrana. A mayor concentración bacteriana en el medio, mayor concentración existe de AHL. AHL entra libremente en la célula y se une a su receptor LuxR permitiendo actuar a LuxR como promotor de la sintesis proteíca.

En Gram positivos se producen peptidos auto-inductores (AIP) que precisan para entrar en la célula un sistema transportador en la membrana y activan un sistema de fosforilación que permite la activación de un promotor de la sintesis proteíca.

Hay un sistema de comunicación entre especies. Descrito sobre todo en Vibrio harveyi. La partícula mensajera es un furanosil borato diester. Esta molécula es sintetizada por un sistema enzimático, que es detectado en casi todas las bacterias por lo que presumiblemente estas partículas es producida en casi todas las bacterias.

La importancia de esto es que tambien se han detectados elementos bacterianos que anulan a estas particulas señales en bacterias como E. coli y S. typhimurium, haciendo que los grupos bacterianos perciban señales erroneas en su entorno e impidan la producción de factores de virulencia. Estas particulas son objetos de estudio para su uso como agentes antipatógenos distintos a los antibióticos clásicos.

Interspecies communication in bacteria. Michael J. Federle and Bonnie L. Bassler. J. Clin. Invest. 2003;112 1291-1299

miércoles, noviembre 05, 2003

"Percepción de quorum"

Comienza una serie de articulos (a texto completo) en Journal of Clinical Investigación en los cuales se describe el comportamiento de las bacterias como grupo y sus implicaciones en la patogenia y el tratamiento de las infecciones.

Hasta hace bien poco se contemplaban las bacterias como particulas aisladas sin más. Pero las bacterias interaccionan entre ellas como un grupo, por medio de señales, actuando cada individuo segun las senales que reciben de sus compañeras. Estas señales condionan la expresión de particulas en superficie y secreción de sustancias hacia el medio circundante para favorecer la invasión de la bacteria en un hueped y favorecer la supervivencia de la bacteria en este huesped.

Aparte de la patogenia, este fenómeno, por cierto llamado "quorum sensing" o percepción de quorum, tambien tiene implicaciones el tratamiento. Los antibiótico hoy dí­a empleados estan diseñados para atacar al germen cuando crece como un individuo pero no para cuando las bacterias crecen en una comunidad como por ejemplo el biofilm. Esto hace que gérmenes, considerados disueltos en el medio, que son sensibles al antibióticos resistan a este antibiótico creando un armazon extracelular (biofilms) que impide la acción de antibióticos sobre la bacteria. Esto ocurre en endocarditis, neumonia en fibrosis quistica.... , no existiendo antiobiótico que mate a estas bacterias en biofimls.

Bacterial communication and group behavior. E. Peter Greenberg. J. Clin. Invest. 2003;112 1288-1290

Interspecies communication in bacteria. Michael J. Federle and Bonnie L. Bassler. J. Clin. Invest. 2003;112 1291-1299

Pharmacological inhibition of quorum sensing for the treatment of chronic bacterial infections. Morten Hentzer and Michael Givskov. J. Clin. Invest. 2003;112 1300-1307

sábado, octubre 25, 2003

A ver ya si puedo explicar que es el genotipado MIRUs de una manera clara.

Este método realiza el tipado de las micobacterias mediante un código numérico que corresponde al número de repeticiones en 12 loci diferentes de unas secuencias genética denominadas "mycobacterial interspersed repetitive units" (MIRUs)

Las repeticiones de estas secuencias son detectadas por PCR. Se emplea un PCR multiplex en la cual se usan como cebadores oligonucleotidos correspondientes a las regiones adyacentes a estas secuencias genéticas repetitivas que se identificaron en el genoma de M. tuberculosis H37Rv.

Se emplean 4 "mezclas de PCR multiplex", cada una dirigidas a tres de estos locus identificados con secuencia repetidas, estudiandose así 12 loci. En cada "mezcla de PCR multiplex" los primers de cada pareja de oligonucleotidos son marcados con una molécula distinta pudiendose de esta manera identificar el producto amplificado de cada unos de los 12 loci.

El producto amplificado de cada cepa a estudiar se somete a un secuenciador estimandose el tamaño de los fragmentos amplificados. Los datos obtenidos fueron sometidos a análisis mediante software. El número de unidades repetidas en cada locus se calcula mediante el tamaño de los fragmentos amplificados con primers específicos de las regiones que bordean los MIRUs.

Si esto aún no ha quedado claro recomiendo leer:

Automated High-Throughput Genotyping for Study of Global Epidemiology of Mycobacterium tuberculosis Based on Mycobacterial Interspersed Repetitive Units. Philip Supply, Sarah Lesjean, Evgueni Savine, Kristin Kremer, Dick van Soolingen, and Camille Locht. J. Clin. Microbiol. 2001.39:3563-3571.

lunes, octubre 20, 2003

Se ha publicado una breve revisión sobre los métodos de tipado moleculares de micobacterias, en New England Journal of Medicine, en la cual se describen someramente distintos métodos.

En ella se reseña también que han aportado estas técnicas en la compresión de la transmisión, patogenia y evaluación de los programas de control de la infección.

Sin embargo una de las técnicas no está descrita claramente y para quien no maneje este tema, como es mi caso, puede ser dificil de comprender. Esta técnica a la que me refiero es el genotipado MIRUs (mycobacterial interspersed repeat units) y que no me atrevo a traducir.

A juicio de los autores de la revisión esta técnica se promete adecuada para su aplicación de manera rutinaria. Permitiria identificar paceintes infectados por la misma técnica varios días después de una baciloscopia. Estos pacientes pueden ser interrogados inmediatamente despues de ser diagnósticados pudiendo ser una herramienta importante para identificar lugares de transmisión y focos de infección posibilitando una actividad más intensiva de los preventivistas en el control de la tuberculosis.

Molecular Epidemiology of Tuberculosis. Peter F. Barnes, M.D., and M. Donald Cave, Ph.D. New England Journal of Medicine. 2003;349:1149-1156

Espero contar en otro escrito como "funciona" esta técnica. Eso cuando me entere.

martes, octubre 14, 2003

S.S. Lee y cols publican un grupo de factores pronosticos que nos pueden permitir predecir una respuesta viral sostenida en el tratamiento con alfa-2a interferon pegilado. Establecen estos factores pronosticos analizando tres estudios que englobaban 814 pacientes tratados con interferon pegilado.

Variables independientes asociados con una respuesta sostenida fueron:
- un genotipo viral distinto al 1
- baja carga viral previamente al iniciar el tratamiento.
- edad menor de 40 años
- ausencia de cirrosis
- peso corporal menor a 85 kg

Un descenso menor de 2 logaritmos en la carga viral en la semana 12 predice también una respuesta sostenida, con un valor predictivo negativo del 98 %.

Lee SS, Heathcote EJ, Reddy KR, Zeuzem S, Fried MW, Wright TL, Pockros PJ, Haussinger D, Smith CI, Lin A, Pappas SC. Prognostic factors and early predictability of sustained viral response with peginterferon alfa-2a (40KD). J Hepatol. 2002;37(4):500-6.

domingo, octubre 12, 2003

En el diagnóstico de las infecciones respiratorias por Nocardia spp. la tinción más sensible es la tinción de Gram. La sensibilidad de la tinción ácido-alcohol resistente modificada es del 51 % respecto a la tinción de Gram. La tinción ácido-alcohol resistente solo debe ser usada para confirmar la ácido-alcohol resistencia de formas compatibles con Nocardia observadas en el Gram.

Nocardiosis. Review of Clinical and Laboratory Experience. Journal of Clinical Microbiology, 2003;41(10):4497-4501.